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            細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法) 使用說明書

            發布時間:2022-04-07   點擊次數:272次

            細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)

            使用說明書

            【產品名稱】

            通用名:豬細小病毒抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)

            英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Parvovirus  (ELISA)

            【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

            【預期用途】 豬細小病毒病是由豬細小病毒Porcine Parvovirus,PPV)引起豬的繁殖障礙性疾病,其特征為受感染的母豬,特別是初產母豬產出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔豬,而母豬本身無明顯癥狀。

            本試劑用于檢測豬血清中豬細小病毒抗體,可用于豬細小病毒疫苗免疫效果評價。

            【原    理】

                本試劑盒由預包被豬細小病毒抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬細小病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有豬細小病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶標結合物反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬細小病毒抗體。

            【試劑盒組成】

            序號

            名稱

            規格/96T×1

            規格/96T×2

            規格/96T×5

            1

            酶標記物

            11ml×1(紅蓋)

            11ml×2(紅蓋)

            26ml×2(紅蓋)

            2

            樣品稀釋液

            50ml×1(黃蓋)

            50ml×1(黃蓋)

            200ml×1(黃蓋)

            3

            20X濃縮洗滌液

            40ml×1(白蓋)

            40ml×1(白蓋)

            200ml×1(白蓋)

            4

            底物液A

            6ml×1(白蓋)

            11ml×1(白蓋)

            26ml×1(白蓋)

            5

            底物液B

            6ml×1(黑蓋)

            11ml×1(棕蓋)

            26ml×1(黑蓋)

            6

            終止液

            6ml×1(黃蓋)

            11ml×1(黃蓋)

            26ml×1(黃蓋)

            7

            陽性對照

            1.0 ml×1(紅蓋)

            1.5 ml×1(紅蓋)

            2.0 ml×1(紅蓋)

            8

            陰性對照

            1.0 ml×1(綠蓋)

            1.5 ml×1(綠蓋)

            2.0 ml×1(綠蓋)

            9

            酶標板

            96T×1

            96T×2

            96T×5

            10

            蓋板膜

            1

            2

            5

            11

            自封袋

            1

            1

            2

            12

            說明書

            1

            1

            1

            13

            稀釋板

            1

            2

            5

             

            【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個月。

            包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。

            【適用儀器】 450nm、630nm波長的酶標儀,37℃恒溫設備,可調微量移液器。

            【樣品準備】

            1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。

            2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。

            3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

            【檢驗方法】

            1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。

            2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

            3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

            4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?0分鐘。

            5.甩去孔內液體,每孔加350 ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。

            6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。

            7.洗滌,同步驟5。

            8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應10分鐘。

            9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值,無參比波長用空白孔調零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

            【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照的平均OD值即ODNC0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC0.6。

            【檢驗結果的判定】

            1.樣品的OD值即ODS;

            2.閾值計算:SP值=(ODS-ODNC/(ODPC-ODNC);

            SP值≥0.2,結果判定為陽性;SP值<0.2,結果判定為陰性。

            3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。

            【試驗方法的局限性】

                該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬細小病毒抗體,根據SP值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

            【注意事項】

            1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

            2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

            3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

            4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以完全溶解。

            5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

            6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

            7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

            8.不同批號試劑組分不得混用。


            上海仁捷生物科技有限公司

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